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陰道毛滴蟲PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

發(fā)表時(shí)間:2021-04-14
陰道毛滴蟲PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:
①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

試劑使用須知:
(1)請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進(jìn)行安全操作。
(2)通常購(gòu)買試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。
(3)萬(wàn)一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對(duì)于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
(4)購(gòu)買后,請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng);做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),做好必要的安全對(duì)策;對(duì)沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護(hù)用具,小心翼翼進(jìn)行操作。

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